海藻糖在体细胞、精子细胞冷冻保护中的应用，AVT为您带来高品质注射级海藻糖

 说到海藻糖的应用，那真的是不胜枚举，在上一期的文章里AVT小编给小伙伴们介绍了海藻糖在冷冻卵母细胞中如何发挥功效，围绕这一话题，本期小编带来海藻糖在体细胞、精子细胞冷冻保护中的应用。

 对冷冻保护剂的研究一直未间断过。冷冻保护剂是一种合理的盐类缓冲液,似乎可减少高盐对细胞的损害。冷冻保护剂包括:渗透性保护剂,如丙二醇(propanediol ,PROH)、乙二醇(ethylene glycol，EG)、二甲亚砜( dimethyl sulfoxide , DMSO)等;非渗透性保护剂,如蔗糖、海藻糖、聚乙二醇等。联合使用玻璃化冷冻保护剂可降低毒性，提高保护作用。适宜的冷冻保护液是目前玻璃化冷冻卵母细胞的焦点，而海藻糖在此方面表现出明显优势并逐渐得到重视。

 卵母细胞冷冻成为一种必不可少的辅助生殖技术，可以绕过一些道德、伦理和宗教等在冷冻胚胎方面的限制。 但目前卵母细胞的冷冻技术尚不完善，尚处于尝试摸索阶段。

 海藻糖在体细胞、精子细胞冷冻保护中有着哪些应用呢？

 Satpathy等[1]利用胞外高浓度的海藻糖在37℃孵育7h的方法,使--部分海藻糖渗透到红细胞内。胞内的海藻糖能够充分发挥其在细胞膜内的渗透保护作用，而且在孵育后的红细胞内三磷酸腺苷(ATP)及2,3-二磷酸甘油酸(2 ,3-DPG)的水平和新鲜红细胞内的含量一样。海藻糖已被作为一种很重要的渗透压保护剂。中国庄远等利用海藻糖冻干紅1isI细胞,分别采用4C,22°C和37°C的温度,海藻糖浓度分别为0,200 ,400 ,600, 800和1 000 mmol/L,不同的孵育时间2,4,6,8和10h。最终发现最适合的海藻糖载入红细胞的方法是在胞外浓度为800mmol/L,379C中孵育8h。海藻糖能够到达细胞内的浓度有利于红细胞的保存。Pietramaggiori 等[7]研究在37°孵育2h的条件下利用血小板的胞吞作用使海藻糖载入到血小板内部，利用5%小牛血清蛋白和50 mmol/L的海藻糖进行冻干，复水后有85%的血小板存活,其功能与对照组没有差异。说明海藻糖在冻干过程中可有效保护血小板。

 Tang等[2]在37°C将血小板孵育在40mmol/L的海藻糖内4h后行冻干，结果孵育后血小板内pH值与新鲜组相同，且孵育后血小板内pH值在复水的4h内没有变化，说明海藻糖有稳定血小板作用。

 He等[3]利用gao效液相色谱法研究胞外0.4 mol/L海藻糖在39°C,10min的介导下载入到小鼠肝细胞内的海藻糖浓度为0.07mol/L,细胞存活率达到90%,而时间延长至1~2h胞内海藻糖浓度达到0.17 mol/L,但成活率仅72%。

 Katenz 等[4]研究发现,0.2 mol/L的海藻糖和10%DMSO联合冷冻肝细胞,与对照组相比海藻糖组明显增加成活率。

 He等[5]利用石英毛细微管作为冷冻载体,2mol/LPROH和0.5mol/L海藻糖用玻璃化冷冻小鼠胚胎干细胞得到细胞成活率和未冷冻的对照组相似,并且细胞在增殖及功能_上无明显差异。

 Rodrigues等[6]进行脐血干细胞的.冷冻保存研究，采用30mmol/L的海藻糖和2.5%DMSO进行冷冻，观察细胞存活率、CD45+CD34+细胞表达率以及干细胞的发育潜能。结果发现:利用低浓度的DMSO合并二糖作为冷冻保护剂可以提高脐血干细胞移植的安全性,并可以减少患者的不良反应的发生。

 McGinnis等[7]在4C和22°C分别用含海藻糖的冻干液干燥保存小鼠精子,精子复水后进行胞浆内单精子注射(ICSI),与不含海藻糖的冻干液相比，含海藻糖的冻干液保存的精子的囊胚发育率明显增高。表明海藻糖在冻干精子的过程中对小鼠精子的发育潜能有很大的保护作用。

 Hu等[8]在用海藻糖冷冻保存猪精子的研究中,利用胞外浓度为0,25,50, 100和200 mmol/L,摸索适合的冷冻海藻糖浓度,100mmol/L的海藻糖冷冻的精子活动率为49.89%,顶体完整性为66.52%,膜完整性为44.61%，而浓度增加到200mmol/L时上述检测指标均下降。

 海藻糖在体细胞、精子细胞冷冻保护中的应用，AVT为您带来高品质注射级海藻糖。

 参考文献

[1] Satpathy GR, Torok Z, Bali R, et al. Loading red blood cells with trehalose: a step towards

[2]biostabilization[J]. Cryobiology, 2004, 49(2): 123-136.

Pietramaggiori G, Kaipainen A, Ho D, et al.Trehalose lyophilized platelets for wound healing [J].W ound Repair Regen, 2007, 15(2): 213-220.

[3] Tang M, Wolkers WF, Crowe JH, et al. Freeze- dried rehydrated human blood platelets regulate intracellular pH [J ] . Transfusion,2006, 46(6): 1029-1037.

[4] He XM, Amin AA, Fowler A, et al. Thermally induced introduction of trehalose into primary rat hepatocytes [J]. Cell Preservation Technology, 2006, 4(3): 178-187.

[5] Katenz E, Vondran FW, Schwartlander R, et al. Cryopreservation of primary human hepatocytes: the benefit of trehalose as an additional cryoprotective agent[J]. Liver Transpl, 2007, 13(1): 38-45.

[6] He X, Park EY, Fowler A, et al. Vitrification by ultra-fast cooling at a low concentration of cryoprotectants in a quartz micro-capillary: a study using murine embryonic stem cells[J]. Cryobiology, 2008, 56(3): 223-232.

[7] Rodrigues JP, Paraguassu- Braga FH, Carvalho L, et al. Evaluation of trehalose and sucrose as cryoprotectants for hematopoietic stemcells of umbilical cord blood [J]. Cryobiology, 2008, 56 (2): 144-151.

[8] McGinnis LK, Zhu L, Lawitts JA, et al. Mouse sperm desiccated and stored in trehalose medium without freezing[J]. Biol Reprod, 2005,73(4): 627-633.

[9] Hu JH, Li QW, Li G, et al. The cryoprotective effect of trehalose supplementation on boar spermatozoa quality[J]. Anim Reprod Sci, .2009, 112(1-2): 107-118.

本文内容节选自《海藻糖用于玻璃化冷冻卵母细胞的研究》